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药用植物种子的品质检验

3.2.6.3 剥胚法
    将种子在清水中浸泡24h，使种皮软化，切开种皮，有胚乳的种子，还须将胚乳切开，用解剖刀和解剖针小心地取出胚。放在铺有湿润滤纸的培养皿内，每皿50粒，重复一次，放在20-25℃的温箱中，经2-10d后即可观察胚的生长情况。有生活力的胚在这段时间仍然坚实而呈白色，开始生长或转变为绿色；而死胚则变色腐烂。离体胚测定和TTC法测定一样比普通测定要快，但取胚时胚较易受伤。该法适于测定长度大于5mm种子的生活力。
3.2.6.4 荧光法
    种子在衰老过程中，体内将产生一系列生理生化变化，导致化学成分在质和量上发生变化，活细胞的蛋白质、核酸和核苷酸等都具有荧光性质。用紫外线荧光灯照射剖切的种子，具有生活力的种子能发出蓝色、蓝紫色、紫色或蓝绿色的明亮荧光，而失去生活力的种子则显黄色、褐色或无色并带有黑斑和褐斑。检验时把种子纵切成两瓣（每个样品至少检验200粒），放在培养皿上，切面朝上，放在波长为254nm的紫外线荧光灯下照射并进行观察。种子距光源约10cm，观察种子剖面及滤纸上有无荧光反应。
3.2.7 种子活力及其测定方法
    种子活力是指种子的健壮度，是种子质量的重要指标，是指在广泛的田间条件下，决定种子迅速整齐出苗和长成正常幼苗的潜在能力的总称。活力不同于发芽率，它们差别很大，一般种子发芽率高，并不等于其活力也高，而高活力的种子发芽率也一定高。活力不同于生活力，后者是指种子发芽的潜在能力或种胚所具有的生命力，通常指一批种子中具有生命力的种子数占种子总数的百分率。种子活力在生产上是很有用的指标。高活力的种子表现在以下几个方面：田间出苗率高且整齐、抵抗逆境能力强、对病虫杂草的竞争能力强、种子耐藏性高。
    影响种子活力的因素很多，有遗传特性、栽培方法、气候条件、种子贮藏条件、种子处理等。测定种子活力的方法分为物理法、生理法、生化法。
3.2.7.1 物理方法
    （1）种子大小与质量的测定一般情况下，种子越大，粒重越高，活力也高。因此可以根据种子的大小和粒重来判断种子活力的大小。
    （2）电导率测定电导率测定法的原理是活力差的种子通常细胞膜有不同程度的破损，产生渗漏现象，细胞质可渗漏出来。种子浸泡在无离子水中时，种子中一些可溶性物质渗入水中，增加了溶液中的离子浓度，提高了浸泡液的电导率，根据电导率的高低，可以判断种子活力的高低。其方法是取一定量的种子（1-10g），用蒸馏水、无离子水反复冲洗几次，然后浸泡在10-30mL无离子水中，振荡后，放于30℃条件下静置3h，过滤，用电导率仪测定过滤出的浸泡液的电导率，电导率高的种子活力低，电导率低的种子活力高。
3.2.7.2 生化方法
    （1）TTC定量测定法
     应用TTC法，测定种子活力的原理与测定生活力的相同，但所使用的方法不同。测定种子活力采用定量法，测定生活力采用定性法。TTC溶液在pH值6-8范围内能达到较好的染色效果，用每升0.2mol的磷酸溶液配制成1%的TTC溶液，把种胚浸入TTC溶液一定时间后，取出种胚用丙酮匀浆，过滤，其上清液在分光光度计中于波长490nm下比色。根据光密度的高低来判断种子活力的大小。
    现以用定量法测定绞股蓝种子的活力为例，取一定数量的绞股蓝种子，清水浸泡24h，分别取种子50粒，沿种子胚的中心线纵切成两部分，把一半种子放入垫有滤纸的培养皿中，倒入1%的TTC溶液，以盖没种子为度，把培养皿放入30℃的恒温培养箱中，定时检查种子的染色情况；把切开的另一半种子放在沸水中煮5min，同样条件下进行染色。以上各重复3次。染色56h后，发现绞股蓝种子的染色有明显的区别，分别取染成红色、浅红色、未染色的种子各7粒，用清水冲洗2-3次，剥去种皮，分别放入研钵中，加入适量的丙酮，研磨提取，倒入10mL的容量瓶中，再用丙酮冲洗研钵2-3次，定容并摇匀。把提取液分别倒入10mL的离心管中，在3000r/min的速度下离心5min，吸取上清液，用分光光度计测定光密度，波长为490nm，以丙酮作为空白对照。每7粒种子凡光密度值在0.129-0.135，为高活力的种子，种子能发芽；光密度值在0.025-0.028，为低活力的种子，种子也能够发芽；光密度值在0.004-0.007，为无活力的种子，种子不能发芽；种子煮沸杀死后的光密度值是0.001-0.002。把上述结果与种子的发芽率作对照，结果表明由定量法测定的绞股蓝种子活力与发芽结果相符。这个试验中绞股蓝种子染色时间较长，可能与种子内部结构致密性有关。在分析其他种子活力时，具体染色时间因种而异，通过研究确定合适的染色时间。
    （2）幼苗生长率的测定
将不同活力的种子进行发芽，3d后观察测定幼苗高。幼苗越高表示活力越强。
    （3）发芽指数和活力指数
Gi=Gt/Dt
式中：Gi--发芽指数；
Gt--t日的发芽数，粒；
Dt--发芽日数，d。
    用常规发芽法，每天记载发芽数（如果发芽试验在一个月以上，可两天或数天记录一次），然后计算发芽指数。
    例如：有两批种子，它们的发芽率都为90%，但是它们每天的发芽情况不同。
发芽日数1、2、3、4、5、6、7、8、9、10
A样品和B样品发芽数分别为：
A样品：6、4、8、12、19、11、17、3、5、5；
B样品：25、10、15、20、10、7、3、0、0、0。

样品A发芽指数(Gi)= + + + + + + +

+ + =23.3；

样品B发芽指数(Gi)= + + + + + + +

+ + =43.6。
由此可见，这两批种子的发芽率虽然相同，但发芽指数却是样品B大于样品A，结果表明B样品的活力高。从中我们可以看出发芽指数比发芽率更能反映种子的活力状况。
活力指数V=S·Gt/Dt
式中：S--幼苗的生长势，也就是在种子发芽几天后的
幼苗大小或干重。
一般选择第几天的幼苗可自由确定，但幼苗通常不宜太长。禾谷类种子宜选择中期幼苗。活力指数也就是幼苗生长势和发芽指数的积，它考虑的因素较多，是种子活力的很好指标。

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